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A cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), também conhecida pela sigla em inglês HPLC (High Performance Liquid Cromatography), é um importante método de separação utilizado praticamente em todos os campos da química, sendo largamente utilizado para analisar e purificar componentes de amostras complexas. A técnica consiste em bombear uma mistura de solventes (fase móvel) através de um cilindro preenchido por um material (fase estacionária – o tipo de material define o mecanismo de separação a ser utilizado), e como cada substância apresenta interação diferente com fase móvel e fase estacionária, estas substâncias se deslocam em velocidades diferentes dentro da coluna para hplc, promovendo assim a separação. A coluna para hplc possui diversas características que determinam sua escolha, como comprimento, diâmetro interno, tamanho de partícula, fase ligada, tamanho de poro, entre outros.
CARACTERÍSTICAS APRESENTADAS DA COLUNA PARA HPLC
A coluna para hplc utiliza sílica ou material polimérico como material de suporte, ou seja, base estrutural para aplicação da fase ligada, que dependerá do mecanismo de separação a ser utilizado (fase reversa e fase normal são exemplos de modos de cromatografia). A coluna para hplc é fabricada geralmente em aço inoxidável de alta qualidade, para garantir a resistência mecânica necessária para suportar pressões de até 6000 psi. As dimensões da coluna para hplc determinam o volume máximo de amostra que pode ser injetada durante a análise. A coluna para hplc mais comum é a coluna de fase reversa, que utiliza sílica ou polímeros como material de suporte e sua superfície é quimicamente modificada por compostos apolares (hidrofóbicos), que irão interagir com uma fase móvel mais polar. A vida útil de uma coluna para hplc depende muito da pressão de trabalho, agressividade química dos solventes e modificadores utilizados, entre outros cuidados que o usuário precisa se preocupar, como filtração de fase móvel e amostra, qualidade dos solventes, entre outros.
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